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          RNA純化原理步驟

          日期:2023-02-08 22:19
          瀏覽次數:114
          摘要:RNA純化原理步驟

             TRIZ0L試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RN與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯仿時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相,離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。


          步驟:


          1、細胞或組織,加入0.4ml TRIZOL試劑后勻漿。


          2、室溫靜置5分鐘。


          3、加入1/5 TRIZOL試劑體積量的氯仿,劇烈震蕩混勻。


          4、室溫靜置5分鐘,12000g 4℃離心15分鐘。


          5、將上清液轉移至新的離心管中,加入與上清液等體積的異丙醇,顛倒混勻。


          6、室溫靜置10分鐘,12000g 4℃離心10分鐘,棄上清。


          7、向沉淀中加入1ml的75%乙醇的清洗沉淀,12000g 4℃離心5分鐘。


          8、棄上清保留沉淀,干燥。


          9、沉淀物溶解于11μl的DEPC處理水中。



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