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          熒光抗體染色直接法步驟

          日期:2023-01-15 12:50
          瀏覽次數:88
          摘要: 熒光抗體染色直接法步驟: 1.染色 切片經固定后,滴加經稀釋至染色效價如1:8或1:16的熒光抗體(如兔抗人γ-球蛋白熒光抗體或兔抗人 IgG或 IgA 熒光抗體等),在室溫或37℃染色30min,切片置入能保持潮濕的染色盒內,防止干燥。 2.洗片 傾去存留的熒光抗體,將切片浸入 pH7.4或 pH7.2PBS 中洗兩次,攪拌,每次5min,再用蒸餾水洗1min,除去鹽結晶。 3.用50%緩沖(0.5mol...

          熒光抗體染色直接法步驟:




          1.染色


          切片經固定后,滴加經稀釋至染色效價如1:8或1:16的熒光抗體(如兔抗人γ-球蛋白熒光抗體或兔抗人 IgG或 IgA 熒光抗體等),在室溫或37℃染色30min,切片置入能保持潮濕的染色盒內,防止干燥。




          2.洗片


          傾去存留的熒光抗體,將切片浸入 pH7.4或 pH7.2PBS 中洗兩次,攪拌,每次5min,再用蒸餾水洗1min,除去鹽結晶。




          3.用50%緩沖(0.5mol/L 碳酸鹽緩沖液 pH9.0~9.5)甘油封固、鏡檢




          4.對照染色


          ①正常免熒光血清染色,如上法處理切片,結果應為陰性。




          ②染色抑制試驗(一步法):將熒光抗體和未標記的抗體球蛋白或血清(相同)等量混合,如上法處理切片。結果應為陰性。


          為證明此種染色抑制不是由于熒光抗體被稀釋所致,可用鹽水代替未標記抗血清,染色結果應為陽性。此法結果較二步法穩定。




          ③類屬抗原染色試驗,前面已作敘述。


          直接法比較簡單,適合做xi 菌、螺旋體、原蟲、真jun 及濃度較高的蛋白質抗原如腎、皮膚的檢查和研究。




          此法每種熒光抗體只能檢查一種相應的抗原,特異性高而敏感性較低。

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