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          細胞復蘇具體操作

          日期:2023-01-16 00:11
          瀏覽次數:57
          摘要: 細胞復蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。 具體操作: 一. 實驗前準備: 1.將水浴鍋預熱至37℃ 2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。 3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等等。 二.取出凍存管: 1.根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。 2.從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外...

          細胞復蘇的原則-快速融化:必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。

          具體操作:

          一. 實驗前準備:

          1.將水浴鍋預熱至37℃

          2.用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。

          3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等等。

          二.取出凍存管:

          1.根據細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。

          2.從液氮罐中取出細胞盒,取出所需的細胞,同時核對管外的編號。

          三.迅速解凍:

          1.迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。

          2.約1-2min后凍存管內液體完全溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內。

          四.平衡離心:

          用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min

          五.制備細胞懸液:

          1.吸棄上清液。

          2.向離心管內加入10ml培養液,吹打制成細胞懸液。

          六.細胞計數:

          細胞濃度以5×105/ml為宜。

          七.培養細胞:

          將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內,將培養瓶放入37℃和5%CO2的培養箱內2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續培養培養,換液的時間由細胞情況而定。

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