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          常規細胞初代消化培養操作步驟

          日期:2022-11-29 18:02
          瀏覽次數:57
          摘要: 常規細胞初代消化培養操作步驟: 1.準備:取各種已消du 的培養用品置于凈化臺面,紫外線消du 20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2.布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。 3.處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。 4.剪切:用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊,以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角燒瓶中,結扎瓶口或塞以膠塞。 5.消化:或用恒溫...


          常規細胞初代消化培養操作步驟:

          1.準備:取各種已消du 的培養用品置于凈化臺面,紫外線消du 20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

          2.布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。

          3.處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。

          4.剪切:用眼科剪把組織切成2~3毫米大小的塊,以便于消化。加入比組織塊總量多30~50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角燒瓶中,結扎瓶口或塞以膠塞。

          5.消化:或用恒溫水浴,或置于37℃溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應搖動一次,如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

          6.分離:在消化過程中見消化液發混濁時,可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細胞團或單個細胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速(500~1000轉/分)離心消化液5分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養液。

          7.計數:用計數板計數,如細胞懸液細胞密度過大,再補加培養液調整后,分裝入培養瓶中。對大多數細胞來說,pH要求在7.2~7.4范圍,培養液呈微紅色,如顏色偏黃,說明液體變酸,可用NaHCO3調整。

          8.培養:置于36.5℃溫箱培養,如用CO2溫箱培養,瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布塞易生霉菌,每次換液時需要換新塞。

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